Use of Chelex-100 for the molecular diagnosis of five animal pathogens / Uso de Chelex-100 para el diagnóstico molecular de cinco patógenos de animales

Abstract Molecular tools have improved conventional veterinary diagnosis. Acid nucleic extraction is a key step for downstream applications. This work aimed to compare the DNA extraction method Chelex-100 resin (M1) with Whatman® cards (M2), phenol-chloroform (M3), or commercial kits (M4), and to determine the most sensitive and inexpensive one for its diagnosis of animal pathogens that, despite their economic or zoonotic relevance, receive little attention. DNA was isolated from urine, organs, semen, blood and intestinal mucous, from the bacteria Leptospira interrogans serovar Pomona Pomona (by M1 and M2), Brucella melitensis (by M1, M3 and M4), and Salmonella ser. Abortusequi (by M1 and M4), and the parasites Leishmania spp. (by M1, M3 and M4), and Eimeria spp. (by M1 and M3), respectively. The sensitivity of each method was assayed by Polymerase Chain Reaction (PCR). The M1 showed similar sensitivity for Salmonella ser. Abortusequi, Leishmania spp., and Eimeria spp., being better for L. interrogans serovar Pomona Pomona and slightly lower for B. melitensis. For the first time, a simple and economic method was successfully employed for extracting DNA from these animal pathogens, especially important in low-resource settings, contributing to the diagnosis of leptospirosis, brucellosis, leishmaniasis, and coccidiosis; as well as to the molecular epidemiology of salmonellosis in stallion from semen samples.

Resumen Las técnicas moleculares han contribuido a mejorar el diagnóstico veterinario tradicional y la extracción de ácidos nucleicos es determinante. El objetivo de este trabajo fue comparar el método de extracción de ADN Chelex-100 (M1) con papel Whatman (M2), fenol-cloroformo (M3) o kits comerciales (M4), y determinar un método sensible y de bajo costo para el diagnóstico de patógenos de animales económica o zoonóticamente relevantes y que reciben poca atención. A partir de orina, órganos, semen, sangre y mucosa intestinal se extrajo el ADN de las bacterias Leptospira interrogans serovar Pomona Pomona (con M1 y M2), Brucella melitensis (con M1, M3 y M4), Salmonella ser. Abortusequi (M1 y M4), y de los parásitos Leishmania spp. (M1, M3 y M4) y Eimeria spp. (M1 y M3), respectivamente. La sensibilidad de los protocolos fue analizada por PCR. El método M1 demostró una sensibilidad similar para S. Abortusequi, Leishmania spp. y Eimeria spp., siendo mejor para L. interrogans y levemente menor para B. melitensis. Por primera vez se usó exitosamente en estos patógenos veterinarios un método simple y económico para extraer ADN, especialmente importante en laboratorios de bajos recursos económicos, contribuyendo al diagnóstico de leptospirosis, brucelosis, leishmaniasis y coccidiosis, así como también a la epidemiología molecular de salmonelosis en muestras de semen de caballos.

Reducción del Riesgo en Equipos Biomédicos y en Instalaciones Eléctricas de Entornos Clínicos / Risk Reduction in Electrical Networks and Safety of Biomedical Equipment in Clinical Settings

Resumen Se analizan 112 auditorías de instalaciones eléctricas y seguridad de equipos biomédicos en 78 Institutos de Medicina Altamente Especializada (IMAE) del Uruguay, realizadas a lo largo de 14 años, clasificando el nivel de riesgo y de cumplimiento de normas desde el punto de vista de Ingeniería Clínica. Cada visita incluye una encuesta al personal encargado de mantener y gestionar la infraestructura eléctrica y el equipamiento biomédico, que abarca el estado de mantenimiento, el control y la documentación de las instalaciones eléctricas y del equipamiento biomédico. Se evalúa el riesgo con un puntaje de 0 a 4. En 2004-2007 el 74% de los IMAE tenía irregularidades en la instalación eléctrica, gestión de equipamiento, control de calidad o documentación. Además, un 15% de los que tenían problemas, tenía en particular equipamiento indicado como "equipo peligroso". En los períodos siguientes esta proporción baja paulatinamente hasta 0% en 2016-2017. No obstante, continúa existiendo un déficit en la gestión del equipamiento y en la documentación formal. El aporte de la Universidad en el seguimiento técnico de los IMAE se ha materializado en una mejora en materia de seguridad.

Abstract 112 field inspections to 78 high technology medical centers (IMAE is the Spanish acronym) over 14 years are analyzed. All visits were evaluated as to Clinical Engineering good practices and were assigned a risk level. All audits included a questionaire to maintenance management personnel on electrical network operation as well as on biomedical equipment follow-up and documentation from acquisition to disposal. Risk is assigned a level 0 to 4 at each visit. In 2004-2007, 74% of IMAEs had safety problems in one or more of electrical network, maintenance management or documentation, and 15% of the IMAEs with safety problems had one piece of equipment described as simply "dangerous". Electrical safety problems were eventually reduced to 0% in 2016-2017, probably as a consequence of regular audit and counseling by this University Clinical Engineering Program.